ELISA dengan keputusan yang teruk?Ikuti kami untuk memilih plat Elisa yang betul.
Memilih plat ELISA yang sesuai ialah langkah pertama kepada percubaan ELISA yang berjaya, tetapi ramai orang mengabaikan perkara ini. Apabila orang melakukan eksperimen, mereka selalunya hanya menganggap percubaan itu sendiri, tetapi tidak tahu bahawa produk itu selalunya memberi impak yang besar kepada percubaan. Pemilihan produk yang betul akan menyumbang kepada kejayaan eksperimen. Kami biasanya mempertimbangkan faktor berikut semasa menjalankan eksperimen ELISA:
1.Bentuk bahagian bawah
Pada masa ini, pengilang mereka bentuk telaga berlabel enzim sebagai lajur bebas, dan sewajarnya meningkatkan jarak antara telaga supaya ia boleh diasingkan secara bebas, dengan itu meminimumkan pencemaran silang. Pelbagai jenis plat Elisa mempunyai bentuk dasar telaga yang berbeza. Berikut adalah beberapa bentuk bawah lubang biasa:
Bawah rata: Bahagian bawah adalah mendatar, juga dipanggil bahagian bawah F. Cahaya tidak akan terpesong melalui bahagian bawah, yang boleh menghantar cahaya ke tahap yang paling besar. Gunakan untuk percubaan yang memerlukan bahagian bawah bulat untuk keterlihatan atau sebab lain.
Round Bottom: Juga dikenali sebagai U-bottom, memberikan hasil pembersihan terbaik dan prestasi hibrid, sesuai untuk aplikasi yang perlu menguji sedimen.
C-bottom: Ia boleh memberikan kesan pembersihan yang baik antara bahagian bawah rata dan bahagian bawah bulat, sambil menggabungkan kelebihan bahagian bawah rata.
Cone Bottom: Juga dikenali sebagai V-bottom, ia sesuai untuk pensampelan dan penyimpanan sampel mikro yang tepat untuk pemulihan optimum volum kecil.
2. Warna pinggan Elisa
Terdapat tiga warna plat Elisa: lutsinar, hitam dan putih.
Majoriti ELISA memilih plat lutsinar sebagai bahan eksperimen. Plat Elisa putih dan hitam biasanya digunakan untuk pengesanan luminescence. Plat ELISA hitam itu sendiri menyerap cahaya, jadi isyaratnya lebih lemah daripada plat ELISA putih. Plat Black Elisa biasanya digunakan untuk mengesan cahaya yang lebih kuat, seperti pengesanan pendarfluor; sebaliknya, plat Elisa putih boleh digunakan untuk pengesanan cahaya yang lebih lemah, dan sering digunakan untuk chemiluminescence am dan pembangunan warna substrat (seperti dual luciferase). analisis gen wartawan).
3. Bahan plat Elisa
Bahan biasa ialah polietilena (PE), polipropilena (PP), polistirena (PS), polivinil klorida (PVC) dan polikarbonat (PC).
Bahan yang paling banyak digunakan di ELSIA ialah polistirena dan polivinil klorida. Papan lembut polivinil klorida adalah nipis, boleh dipotong, dan harganya rendah. Kelemahannya ialah kemasannya tidak sebaik papan polistirena, dan bahagian bawah lubang tidak rata seperti polistirena. Tetapi nilai latar belakang yang sepadan juga akan meningkat. Biasanya, rawatan cantuman ion dijalankan pada permukaan plat ELISA, dan kumpulan berfungsi aktif seperti kumpulan aldehid, kumpulan amino, dan kumpulan epoksi dimasukkan ke dalam permukaan polimer untuk meningkatkan prestasi permukaan substrat.
4. mekanisme pengikatan yang berbeza
Pengikatan bahan salutan yang cekap ke permukaan bawah plat adalah langkah penting dalam ELISA. Oleh itu, ciri-ciri struktur dan sifat kimia bahan yang akan disalut perlu dianalisis dengan teliti sebelum eksperimen untuk memilih plat Elisa yang sesuai. Secara umumnya, terdapat beberapa cara untuk mengikat bahan salutan ke bahagian bawah plat: penjerapan pasif, pengikatan kovalen dan penangkapan pertalian.
Penjerapan Pasif: Mekanisme penjerapan pasif adalah kompleks, dan pengikatan antara bahan salutan dan bahagian bawah plat terutamanya bergantung pada daya antara molekul (daya van der Waals) dan ikatan hidrogen. Dalam kebanyakan ELISA, pengikatan bahan salutan ke bahagian bawah plat dicapai dengan penjerapan pasif. Secara amnya, pengikatan antara antigen berat molekul sederhana dan besar (atau antibodi) dan bahagian bawah plat dicapai dengan penjerapan pasif. Ciri hidrofobik/hidrofilik permukaan bawah plat sering dipertimbangkan apabila memilih plat Elisa. Jadual berikut menyenaraikan skop penggunaan dan penggunaan permukaan substrat hidrofilik yang berbeza:
hidrofilik | Keutamaan mengikat | Penggunaan utama |
- | Molekul yang mengandungi kawasan hidrofobik yang ketara, seperti: lipid, lipoprotein, protein besar | Antigen ELISA, FlA, LIA |
tambah lagi | Biomolekul dengan sifat hidrofilik/hidrofobik seperti: protein sederhana hingga besar, imunoglobulin, albumin | Sandwich Antibodi Berganda ELISA, Antigen ELISA |
tambah tambah | Biomolekul dengan sifat hidrofilik/hidrofobik seperti: protein kecil hingga besar, imunoglobulin, albumin, LPS, protein terfosforilasi, glikoprotein | Antibodi berganda ELISA, FIA, LIA |
tambah tambah tambah | Glikoprotein, molekul lipid polar, fosfolipid, kardiolipid | Antigen ELISA |
Tangkapan Afiniti: Tangkapan Afiniti adalah berdasarkan pengikatan khusus makromolekul berlabel kepada reseptor yang sepadan. Makromolekul bertanda boleh diperolehi sama ada dengan gandingan kimia atau melalui kejuruteraan genetik.
Ciri-ciri Tangkapan Affinity ialah:
1. kekhususan yang tinggi
2.Boleh meningkatkan nisbah isyarat-ke-bunyi hasil pengukuran
Permukaan bawah telaga yang lebih biasa ialah: permukaan bersalut streptavidin (streptavidin); permukaan bersalut nikel (Nickel Chelate) dan permukaan bersalut glutathione (Glutathione, GSH).
3. Permukaan Streptavidin: Pertalian tinggi dan kekhususan streptavidin dan biotin digunakan untuk merealisasikan pengikatan plat bawah kepada protein bersalut.
4. Permukaan kelat nikel: Kelat nikel dilekatkan pada permukaan polimer untuk mengikat protein pelakuran dengan tag His (histidin).
5. Permukaan glutathione: Penggunaan kekhususan enzim dan substrat antara glutathione dan glutathione sulfhydryltransferase (GST) untuk mencapai pengikatan plat bawah pada protein kot.
Kenapa pilih pinggan BKMAM Elisa?
Diperbuat daripada 100 peratus bahan polistirena,
Sesuai untuk kultur sel yang melekat,
Tapak rata, ketebalan sekata dan saiz seragam untuk tiang tindak balas,
Steril dengan pakej individu,
Berkualiti tinggi dengan harga kilang.
